Elektroforese en Blotting
Als geladen deeltjes onder invloed van een elektrisch veld door een medium bewegen, spreken we van elektroforese. Dit is een natuurkundig proces. Het geladen deeltje kan een ion zijn, maar ook een eiwit, DNA-molecuul, colloïdeel deeltje of zelfs een cel. Bij diverse analytisch-chemische en bio-analytische scheidingstechnieken wordt gebruik gemaakt van de elektroforetische mobiliteit van deeltjes. Hierbij kan men denken aan gelelektroforese en capillaire elektroforese.
Elektroforese kopen? Wat is een elektroforese eigenlijk? Als geladen deeltjes onder invloed van een elektrisch veld door een medium bewegen, spreken we van elektroforese. Dit is een natuurkundig proces. Het geladen deeltje kan een ion zijn, maar ook een eiwit, DNA-molecuul, colloïdeel deeltje of zelfs een cel. Bij diverse analytisch-chemische en bio-analytische scheidingstechnieken wordt gebruik gemaakt van de elektroforetische mobiliteit van deeltjes. Hierbij kan men denken aan gelelektroforese en capillaire elektroforese.
Verschillende soorten elektroforese
Bij gelelektroforese bewegen moleculen onder invloed van een elektrisch veld in een gel. De moleculen kunnen of DNA-fragmenten of eiwitten zijn. De gels die gebruikt worden, zijn vaak gebaseerd op polymeren. Maar ook agarosegels worden vaak toegepast. Bij capillaire elektroforese wordt het te scheiden mengsel door een capillair geleid, onder invloed van een elektrisch veld.
Elektroforesepapier kopen
Voor deze elektroforetische toepassingen wordt elektroforesepapier en/of blottingpapier gebruikt. Elektroforese of blotting papier kopen? Dit papier kan als rol gekocht worden, maar is ook te koop in pakken met vellen. Er zijn meerdere afmetingen en kwaliteiten elektroforese- en blottingpapier beschikbaar.
Whatman elektroforese- en blottingpapier
De 3MM Chr kwaliteit van Whatman wordt veel gebruikt als vloeipapier (blotting). Deze kwaliteit wordt ook gebruikt voor algemene chemie. Het is een papiersoort van gemiddelde dikte (0,34 mm) dat veelvuldig wordt gebruikt voor algemene chromatografie en elektroforese. De loopsnelheid is 130 mm / 30 minuten.
De Whatman kwaliteit GB003 is een blottingpapier voor algemene toepassingen. Het wordt gemaakt van zuiver basismateriaal (zuiver cellulose van katoenliners, zonder additieven) met een groot absorptievermogen en wordt gebruikt als ondersteuning van de membraangel. Vanwege de dikte (0,8 mm) wordt dit blottingpapier aanbevolen voor lysis/denaturatie van kolonie- en plaqueoverdracht en Western blotting.
Macherey-Nagel elektroforese- en blottingpapier
De drie kwaliteiten van Macherey-Nagel hebben een glad oppervlak, waardoor een gelijkmatige zuigkracht wordt gegarandeerd.
Blottingpapier MN 218B
Blottingpapier MN 218B heeft een dikte van 0.36 mm en een gewicht van 180 g/m2. Zuighoogte 55 – 65 mm per 10 minuten. Dit blottingpapier toegepast om direct contact tussen het blotmembraan en de poreuze afdekplaat van het onderste gedeelte van het opzuigapparaat te voorkomen. Ook als buitenste bekleding van het gel-vloeimembraan bij toepassing van een “sandwich” in de blotcassette. Bij vacuüm-blotting wordt het toegepast om direct contact tussen het membraan en de poreuze vacuümkamer te voorkomen.
MN 827B blottingpapier
MN 827B blottingpapier heeft een dikte van 0.7 mm en een gewicht van 270 g/m2. Zuighoogte van dit blottingpapier iss 130 – 140 mm per 10 minuten. Wordt toegepast om direct contact tussen het blotmembraan en de poreuze afdekplaat van het onderste gedeelte van het afzuigapparaat te voorkomen. Ook bij capillaire overdracht om de vloeistofstroom uit het bufferreservoir op gang te houden en voor het aanbrengen van lagen absorberend papier. Bij halfdroge blotting wordt het toegepast als bufferreservoir, dat tussen plaatelektrode en gel, of tussen plaatelektrode en overdrachtsmembraan wordt geplaatst. Kan ook worden toegepast bij vacuüm-blotting, om direct contact tussen het membraan en de poreuze vacuümkamer te voorkomen.
MN 440B blottingpapier
MN 440B is blottingpapier met een dikte van 1.0 mm en een gewicht van 400 g/m2. Zuighoogte 130 – 145 mm per 10 minuten. Dit blottingpapier toegepast bij capillaire overdracht om de vloeistofstroom uit het bufferreservoir op gang te houden en voor het aanbrengen van lagen absorberend papier. Ook wordt het toegepast bij halfdroge blotting als bufferreservoir, dat tussen plaatelektrode en gel, of tussen plaatelektrode en overdrachtsmembraan wordt geplaatst.
Protran membranen
De Protran-membranen van Amersham bestaan uit van 100% zuiver nitrocellulose. Hierdoor bieden deze een hoog bindend vermogen. Deze membranen zijn bij uitstek geschikt voor eiwitten die een waterige omgeving prefereren: voor het blotten wordt het membraan slechts bevochtigd met water. Verkrijgbaar in verschillende poriegrootten: Protran 0.1 NC (poriegrootte 0,1 µm), Protran 0.2 NC (poriegrootte 0,2 µm) of Protran 0.45 NC (poriegrootte van 0,45 µm).
De veelzijdige Protran® 0.1 NC-membraan (bindend vermogen 231 tot 248 µg IgG/cm²) biedt uitstekende bindingsaffiniteit voor kleine proteïnen, peptiden en nucleïnezuren.
Protran® 0.2 NC (bindend vermogen 150 tot 176 µg IgG/cm²) bindt aan kleine proteïnen (< Mr 20 000).
Protran® 0.45 NC (bindend vermogen 162 tot 180 µg IgG/cm²) is geschikt voor proteïnen van een breed scala aan moleculaire gewichten.
Voor verder gebruiksgemak zijn tevens Western blotting sandwiches (10 sandwiches/verpakking) beschikbaar. Elke sandwich bestaat uit voorgesneden Amersham™ Protran® NC-membranen, voorgemonteerd met 2×3MM Chr filterpapier.